Serological and molecular techniques applied for identification of Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates / Técnicas sorológicas e moleculares aplicadas na identificação de Plasmodium spp. em amostras de primatas não humanos

Abstract The aim of this study was to identify Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates (NHPs) in the state of Maranhão, using classical and alternative techniques for examination of human malaria. A total of 161 blood samples from NHPs were analyzed: 141 from captive animals at a Wildlife Screening Center (CETAS) and 20 from free-living animals in a private reserve. The techniques used were microscopy, rapid diagnostic test (RDT), Indirect fluorescent antibody test (IFAT) and molecular techniques (semi-nested PCR, quantitative real-time PCR and LAMP). Two serological methods (dot-ELISA and indirect ELISA) were also standardized with rhoptry protein-soluble antigen of P. falciparum and P. berghei. Trophozoite forms of Plasmodium sp. were identified on slides from five different animals. No samples were positive through RDT and LAMP. Four samples were seropositive for P. malariae through IFAT. The samples showed low reactivity to ELISA. Plasmodium sp. was detected in 34.16% (55/161) of the samples using qPCR based on the 18S rRNA gene. After sequencing, two samples showed 100% identityl to P. malariae, one showed 97% identity to Plasmodium sp. ZOOBH and one showed 99% identity to P. falciparum . PCR was shown to be the most sensitive technique for diagnosing Plasmodium in NHP samples.

Resumo Neste estudo objetivamos identificar Plasmodium spp. em amostras sangue de primatas não humanos (PNH) do estado do Maranhão, utilizando técnicas clássicas e alternativas para o exame da malária humana. Foram analisadas 161 amostras de sangue de PNH, sendo 141 de CETAS (cativeiro) e 20 de reserva particular (vida livre), utilizando microscopia, teste de diagnóstico rápido (RDT), imunofluorescência indireta (IFI) e técnicas moleculares (semi-nested PCR, PCR em tempo real quantitativo e LAMP). Dois métodos sorológicos (dot-ELISA e ELISA indireto) também foram padronizados com antígenos solúveis de roptrias de P. falciparum e P. berghei. Formas trofozoíticas de Plasmodium sp. foram identificadas em lâminas de cinco animais diferentes. Nenhuma amostra foi positiva em TDR e LAMP. Quatro amostras foram soropositivas para P. malariae na IFI. Os soros de PNH mostraram baixa reatividade pelo ELISA indireto. Plasmodium sp. foi detectado em 34,16% (55/161) das amostras utilizando a qPCR baseada no gene 18S rRNA. No sequenciamento, duas amostras mostraram identidade com P. malariae (100%), uma com Plasmodium sp. ZOOBH (97%) e uma com P. falciparum (99%). A PCR mostrou ser a técnica mais sensível para diagnósticos de Plasmodium em amostras de PNH.

Ulcerative and granulomatous enteritis associated with Molineus torulosus parasitism in neotropical primates / Enterite ulcerativa e granulomatosa com parasitismo de Molineus torulosus em primatas neotropicais

This paper reports eleven cases of ulcerative and granulomatous enteritis associated with Molineus torulosus parasitism in different species of neotropical primates of the Sapajus genus. All of the affected monkeys had been apprehended by the environmental police and were being treated in a rehabilitation center for wild animals. The clinical history was weight loss and debility. During the necropsy, several nodules were found on the duodenum and proximal jejunum wall, with ulcers on the adjacent intestinal mucosa, including the nodules in the pancreas of four monkeys. Histologically, eosinophilic granulomas were observed in the small intestine, associated with fibrosis, eggs and adult models of Trichostrongylidae, etiology consistent with Molineus torulosus. This study describes the first cases of parasitism in Sapajus flavius, a species previously considered extinct, but recently rediscovered, and presents the occurrence of M. torulosus in two other species, Sapajus libidinosus and Sapajus apella.(AU)

São relatados 11 casos de enterite ulcerativa e granulomatosa associada ao parasitismo por Molineus torulosus em diferentes espécies de primatas neotropicais do gênero Sapajus. Todos os macacos afetados haviam sido apreendidos pela polícia ambiental e estavam sendo tratados em um centro de reabilitação de animais silvestres. O histórico clínico era de emagrecimento e debilidade. Durante a necropsia, foram constatados diversos nódulos na parede do duodeno e jejuno proximal, com úlceras na mucosa intestinal adjacente, além de nódulos no pâncreas de quatro macacos. Histologicamente, observou-se no intestino delgado, granulomas eosinofílicos associados à fibrose, ovos e exemplares adultos de tricostrongilídeos, etiologia consistente com Molineus torulosus. O presente trabalho descreve os primeiros casos de parasitismo em Sapajus flavius, uma espécie antes considerada extinta e recentemente redescoberta, e relata a ocorrência de M. torulosus em outras duas espécies, Sapajus libidinosus e Sapajus apella.(AU)